Faktor-faktor yang menentukan kecekapan sintesis DNA

Dalam sintesis DNA, RNA dan asid nukleik bukan semula jadi yang biasa, langkah Deprotection dan Coupling memainkan peranan penting.

Langkah Deprotection adalah untuk mengeluarkan kumpulan DMT pada sokongan pepejal atau kumpulan hidroksil 5' pada nukleosida sebelumnya dengan asid organik, dan mendedahkan kumpulan hidroksil untuk langkah gandingan berikut.Asid trichloroacetic 3% dalam diklorometana atau toluena kebanyakannya digunakan untuk menjalankan langkah penyahlindungan.Kepekatan asid trichloroacetic dan masa penyahlindungan (deblocking time) mendominasi ketulenan produk akhir.Kepekatan rendah dan masa penyahsekatan yang tidak mencukupi meninggalkan kumpulan DMT yang tidak bertindak balas, yang mengurangkan hasil dan meningkatkan kekotoran yang tidak diingini.Masa nyahsekat yang panjang boleh menyebabkan depurine jujukan tersintesis, membentuk kekotoran yang tidak dijangka.

Langkah Gandingan adalah sensitif kepada kandungan air pelarut dan kelembapan di udara.Kepekatan air dalam sintesis hendaklah kurang daripada 40 ppm, lebih baik kurang daripada 25 ppm.Untuk mengekalkan keadaan sintesis kontang, sintesis asid nukleik hendaklah dijalankan dalam persekitaran kelembapan yang rendah, jadi kami mengesyorkan pelanggan kami untuk menggunakanPeralatan Terlarut Amidites, yang boleh melarutkan Fosforamidit serbuk atau berminyak dalam asetonitril kontang untuk mengelakkan sentuhan dengan udara.

Faktor yang menentukan kecekapan sintesis DNA5
Faktor yang menentukan kecekapan sintesis DNA4

Oleh kerana fosforamidit terlarut lebih baik pada keadaan bukan air, dan perangkap molekul untuk menyerap air surih dalam reagen dan amida, ia perlu menyediakanPerangkap Molekul.Kami mengesyorkan 2 g subsieve untuk botol reagen 50-250ml, 5g untuk botol reagen 250-500ml, 10g untuk botol reagen 500-1000ml, dan 20g untuk botol reagen 1000-2000ml.

Pelarutan fosforamidit harus dilakukan di bawah suasana lengai, dan penggantian reagen pengaktif dan asetonitril harus diselesaikan tepat pada waktunya.Reagen Penyekat dan Pengoksidaan harus digunakan secepat mungkin, reagen yang dibuka memberikan jangka hayat yang lebih sedikit, dan kurang aktiviti semasa sintesis.


Masa siaran: Ogos-09-2022