Prinsip Sintesis Asid Nukleik

Sintesis asid nukleik dijalankan menggunakan kaedah trigliserida amida sialik fasa pepejal, di mana hujung 3′ DNA digerakkan pada substrat fasa pepejal dan nukleotida ditambah dalam arah 3′ hingga 5′ sehingga serpihan DNA yang dikehendaki disintesis. .Ini berbeza daripada sintesis DNA dengan penggunaan polimerase DNA.

Hujung 3' bes pertama tidak bergerak pada CPG semasa sintesis, 5'-OH bes seterusnya dilindungi dengan di-p-tolyl trityl DMT, kumpulan amino pada asas dilindungi dengan asid benzoik dan 3' -OH kemudiannya diaktifkan dengan sebatian amino fosfat.1 bes 5 5'-OH 1 bes dan 3'-OH bes seterusnya membentuk trigliserida fosfit, yang kemudiannya dioksidakan dengan iodin kepada trigliserida fosfat, pelindung pada bes kedua 5'-OH dikeluarkan oleh menambahkan asid dikloroasettik DM kitaran melalui penambahan bes seterusnya, dan selepas sintesis pelindung pada 5'-OH dikeluarkan dengan asid lemah Serpihan diputuskan daripada resin pepejal dengan ammonium hidroksida pekat, pelindung dikeluarkan dari asas dengan ammonium hidroksida pekat di bawah pemanasan, ammonium hidroksida dikeluarkan, serpihan dikeringkan dengan vakum, dan asid nukleik disucikan dengan kromatografi cecair atau PAGE.

Langkah-langkah Sintesis Oligo

Menyahsekat

TheKumpulan pelindung DMT 5 hujung dialih keluar dengan menambahkan penyelesaian TCA.

Pengaktifan

Mencampurkan pengaktif dengan monomer oligonukleotida untuk membentuk perantaraan monomer oligonukleotida aktif.

Gandingan

Kumpulan hidroksil 5-terminal bertindak balas dengan perantaraan oligonukleotida aktif dalam tindak balas pemeluwapan antigeneratif untuk membentuk ikatan trigliserida fosfit yang tidak stabil.

Had 

Penambahan agen penyekat melakukan tindak balas penutup asetilasi dengan kumpulan hidroksil berlebihan yang tidak terlibat dalam tindak balas pemeluwapan.

Pengoksidaan 

Penambahan larutan iodin yang mengandungi air bertindak balas dengan ikatan fosfit yang tidak stabil melalui pengoksidaan untuk membentuk ikatan trigliserida asid fosforik yang stabil.

Pembelahan Cyanoethyl

Produk asid nukleik selepas sintesis, dengan penambahan larutan DEA untuk mengeluarkan kumpulan sianoetil daripada ikatan trigliserida fosfat.

Dibelah & Nyahlindung

Serpihan asid nukleik dibelah daripada pembawa fasa pepejal dengan menambahkan larutan ammonium hidroksida pekat dan kemudian dipanaskan untuk mengeluarkan kumpulan pelindung daripada ikatan hidrogen bes.